中药生精冲剂对精索静脉曲张引起的大鼠不育症的治疗
2018年07月28日 5183人阅读 返回文章列表
摘要：目的：研究中药生精冲剂对大鼠精索静脉曲张的影响及疗效。方法：从80只实验性SD雄性大鼠中随机抽出20只作为假手术组，余60只均建立精索静脉曲张病理模型后随机均分为模型组、生精冲剂组和克罗米芬组。45d后测定血清性激素及观察各组大鼠睾丸组织结构来判断生精冲剂的疗效。结果：中药组大鼠光镜下睾丸组织结构优于模型组和克罗米芬组（P<0.05）；生精冲剂组血清性激素FSH、LH、T水平明显低于模型组和克罗米芬组（P<0.05）。结论：中药生精冲剂对精索静脉曲张引起的睾丸损害有保护及修复作用，且可能优于克罗米芬。郑州大学第一附属医院男科王瑞
Treatment of Shengjing powder for infertility in rat with varicocele
WU Yu-feng，WANG Rui, ZHANG Wei-xing，XU Lei, Zhang Yue-xi, Shi Jian-hua
Department of Urology，the First Affiliated Hospital，Zhengzhou University，Zhengzhou Henan 450052, China(WU Yu-feng，WANG Rui, ZHANG Wei-xing，XU Lei, Zhang Yue-xi, Shi Jian-hua)
Correspondence to: Wang Rui, E-mail: huzi918@hotmail.com
Abstract Objective： To study the influence and therapeutic effect of Chinese crude drug Shengjing powder in rats with varicocele. Methods： A total of 80 male Sprague-Dawley rats were evenly randomized into four groups. One group with sham operation, other three were all made into varicocele model and divided into model group, Shengjing powder group and Clomifene group. 45 days later, serum sex hormone was detected and constitution of testes was observed in each group in order to judge the curative effect of shengjing Powder. Results：In Shengjing powder group, the level of serum sex hormone was obviously higher than the model group and the Clomifene group(p﹤0.05), and the constitution of testes which was observed through light microscope also better than model group and the clomifene group. Conclusion ：Shengjing powder might protect and repair the testes from the injury in varicocele, as well better than Clomifene.
Key words Shengjing powder, varicocele, constitution of testes, sex hormone
在青年男性中精索静脉曲张发病率甚至高达11%～16%[1]，已成为是导致男性不育的首位原因。精索静脉曲张可损害睾丸的组织结构及超微结构，引起睾丸生精功能障碍[2]。目前精索静脉曲张的治疗以手术为主，但仍有部分病人不愿手术或手术后效果不佳，采用药物治疗而未行手术或于术后加服中药的精索静脉曲张患者在临床上有一定的效果。我院多年临床研究发现，生精冲剂可促进精索静脉曲张及术后病人的睾丸生精功能的恢复。为探讨生精中药对睾丸组织结构的保护作用，采用动物实验分组进行研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1药物的构成及试剂 生精冲剂：当归、丹参、紫河车、拘杞子、黄芪、菟丝子、仙灵脾等。中药制备方法：将中药常温下清洗后，于70℃下烘干4h后混合、过200目筛粉碎，包装后用Co60辐照（剂量为8KG）灭菌，由郑州大学第一附属医院提供。克罗米芬：上海衡山药业有限公司生产,沪卫药准1995第021002号,批号020502剂量50mg。睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)放免试剂盒购自天津九鼎生物制品有限公司。
1.1.2 动物 SD雄性青春期大鼠80只，体重（200.0±20.0）g，由郑州大学动物实验中心提供。
1.2 模型制备 参考张秋养[3]等方法行左肾静脉不全结扎造成左肾静脉狭窄制作大鼠左侧精索静脉曲张模型。假手术组，打开腹腔后只行分离而不结扎。
1.3 分组 随机抽出 20只为A组（假手术组），其余 60只大鼠采用肾静脉缩窄法建立实验性精索静脉曲张病理模型。造模完成后将此60只大鼠随机均分为B组（模型组）、C组（克罗米芬）和D组（生精冲剂组）。
1.4 给药方法 造模完成后15d开始给生精冲剂组及克罗米酚组灌喂药物，生精冲剂组按4g/kg.d[4]的剂量给药 , 克罗米芬组按20mg/kg.d，模型组和假手术组给予正常饮食。持续给药喂养30d ,于造模后第45d[5]处死大鼠取血及睾丸组织。
1.5 标本的制备及测定 试验大鼠均在麻醉下开腹经腔静脉抽取静脉血，分离并收集血清迅速置-20℃冰柜保存，采取放射免疫法测定试验大鼠血清FSH、 LH、 T。取出实验大鼠双侧睾丸，电子天平称重。左侧睾丸采用常规石蜡切片，HE染色后制成光镜标本。光镜下观察生精小管形态和精子发生状态。包括生精小管、精子、生殖细胞层次分析。
1.6 统计学分析 采用SPSS10.0 for windows 软件进行统计处理。各组实验数据计量资料以均数±标准差( ±s)表示，两组间比较分析用t检验，3组间或者3组以上的比较采用单因素方差分析，检验水准设为α= 0.05 。
2 结果
2.1各组大鼠睾丸重量的变化对比：
模型组睾丸重量显著低于其余3组(P ＜0.05)，生精冲剂组睾丸重量高于模型组和克罗米芬组，但低于假手术组(P ＜0.05)，结果见表1。
表1 各组大鼠睾丸重量比较( ±s)
Table 1.Comparison of testis weight( ±s)
Group
n
Left testis weight(g)
Right testis weight(g)
A
20
1.89±0.26*＃
1.92±0.22*＃
B
20
0.96±0.33＃
1.23±0.33＃
C
20
1.20±0.30*＃
1.58±0.19*＃
D
20
1.53±0.33*
1.80±0.34*
*与B组比，*：P<0.05; ＃与D组比，＃：P<0.05
Compared with the B group, *：P<0.05;compared with the D group, ＃：P<0.05
2.2 各组大鼠血清FSH、LH、T 的变化比较
生精冲剂组FSH、LH值低于模型组与克罗米芬组（P<0.05）；克罗米芬组高于其余三组（P<0.05）。模型组T值低于其余三组（P<0.05）；生精冲剂组、克罗米芬组和假手术组三组间T值无显著性差异（P>0.05），结果见表2。
表2 各组大鼠血清FSH、 LH、 T 的测定结果比较( ±s)
Table 2 Results of serum FSH、 LH、 T measurement( ±s)
Group
n
FSH（IU/L）
LH（IU/L）
T(ng/L)
A
20
3.22±0.65
5.46±1.23
3.55±0.62
B
20
6.23±0.58
8.37±1.75
2.26±0.87△
C
20
6.76±0.57*
8.92±1.78*
3.23±0.76
D
20
4.23±0.45＃
6.87±1.65＃
3.47±0.77
＃与B组和C组比，＃：P<0.05；*与其余3组比，*：P<0.05；△与其余3组比，△：P<0.05
Compared with the B and C groups, ＃：P<0.05; compared with the other three groups,*：P<0.05; compared with the other three groups, △：P<0.05
2.3 各组大鼠睾丸组织结构对比 假手术组:光镜下大鼠睾丸内呈正常组织形态,动静脉血管分布正常,生精小管管径正常,可见各级生精细胞,间质细胞大部分成团状分布(见图1)。模型组:可见生精小管变细、管壁增厚,细胞层次减少和排列紊乱,生精细胞中断,精原细胞、初级精母细胞可见,精子细胞和精子少见,偶见散在间质细胞,血管充血、水肿(见图2)。克罗米芬组：可见生精小管变细，管壁不规则增厚，管腔呈节段性狭窄，细胞层次略减少，可见各级生精细胞但少见成熟精子,可见单个散布的间质细胞,血管充血、水肿(见图3)。生精冲剂组:可见生精小管无明显变细,部分管壁增厚,可见各级生精细胞,成熟精子密度较假手术组低,间质细胞单个及成团均可见,血管轻度充血(见图4)。
图1：假手术组睾丸病理切片（苏木精-伊红染色，×400）
Figure 1. The tissue slice of the testis in the nomal group (HE,×400)
图2：模型组睾丸病理切片（苏木精-伊红染色，×400）
Figure 2. The tissue slice of the testis in the model group (HE,×400)
图3：克罗米芬组睾丸病理切片（苏木精-伊红染色，×400）
Figure 3. The tissue slice of the testis in the Clomifene group (HE,×400)
图4：生精冲剂组睾丸病理切片（苏木精-伊红染色，×400）
Figure 4. The tissue slice of the testis in the Shengjing powder group (HE,×400)
3 讨论
研究发现[6], 人和模型大鼠一样左肾静脉的受压可造成脉管反应，形成左侧精索内静脉曲张, 并建立起相类似的侧支循环。人和大鼠在曲张发生病理上的相似性, 为用大鼠曲张模型研究精索静脉曲张的病理生理提供了理论基础。造模手术后45d通过用带测微器的目镜测量模型组大鼠左精索内静脉直径，观察其曲张程度，出现左侧精索内静脉扩张且两个肾脏重量相似，则表明造模手术成功。
生精细胞构成了睾丸容积的主要部分，精索静脉曲张时睾丸组织的生精小管发生病理损害及各级生精细胞减少、坏死，必然导致睾丸重量下降，容积减少。说明精索静脉曲张造成的睾丸内环境的破坏会使生精细胞减少,且这种破坏对病变侧的损伤更为严重。模型组左侧睾丸比右侧轻,同时都明显低于正常组,说明精索静脉曲张是造成的影响是双侧的，且以曲张侧为主。
睾丸还具有内分泌功能，并受下丘脑-垂体-睾丸轴调控[7]。在睾丸细胞和间质细胞受损后，生精小管萎缩,T下降，负反馈作用下导致中枢性激素水平FSH和LH升高，这也是模型组血FSH和LH水平升高的原因，因此FSH和LH可间接反映睾丸的功能。克罗米芬可竞争性地结合下丘脑的雌激素受体，增加了下丘脑、垂体的负反馈作用，使FSH、LH 分泌增加，LH又使T分泌增加。克罗米芬及生精冲剂都可增加病变的睾丸重量，但后者的效果更明显。在睾丸病理的分析中发现，模型组大鼠睾丸中间质细胞损伤严重，几乎不能找到，推测精索静脉曲张对间质细胞的损伤更大；克罗米芬的治疗主要靠提升FSH和LH，增强对睾丸组织细胞的刺激,而生精冲剂可能保护了睾丸的支持细胞和间质细胞免遭有害物质的损伤。
中药治疗男性不育的疗效已得到国内外大量研究资料的证明。中医学理论认为，精索静脉曲张症的临床症状属“筋瘤”范畴，为血瘀之症。精索静脉曲张引起的不育的机理是血瘀和肾虚。中医药从长期的临床实践中总结出［8］：活血化瘀、滋补肾阴为主治疗少精子症；活血化瘀、滋补肾阳为主治疗弱精子症。生精冲剂以此为本，以活血化瘀中药加滋阴壮阳中药组成,其中当归、丹参具有活血化瘀的作用；紫河车、枸杞子有补肾阴、养血，生精，养肝,治肝肾阴亏；菟丝子、仙灵脾、黄芪（又叫淫羊藿）具有补气、温补肾阳的作用，诸药共用，共收滋肾化源，潻精助育之功。现代医学也证实中药中某些成份能直接促进生育功能，枸杞含有枸杞多糖和多种微量元素［9］，周亚东等［10］发现：枸杞多糖对生精细胞具有保护作用。黄晓兰等［11］在动物实验中发现：枸杞能明显提高睾丸组织中超氧化物歧化酶活性，降低丙二醛量，增强了大鼠抗氧化能力；而赵龙坡等［12］的动物实验证实：枸杞和黄芪对睾丸支持细胞InhβB亚基的转录具有保护作用。另外，紫河车含有多种蛋白质，且具有激素样作用，能促进精子的生成和成熟，仙灵脾促进精液分泌，提高睾酮水平，有效修复睾丸间质细胞的损伤，维持生精小管上皮正常的生精周期［13］。多年来，笔者临床中精索静脉曲张性不育患者的手术后应用生精冲剂治疗，其精子质量及配偶的怀孕率均高于单纯手术者。
本实验是在大量临床观察的基础上，对精索静脉曲张治疗上的深入研究。其结果显示：克罗米芬对于精索静脉曲张导致不育的大鼠生精功能的改善有限[14],而生精冲剂对实验性精索静脉曲张大鼠双睾丸具有明显的保护和修复作用。同时，尽管中药治疗可以对睾丸产生保护性作用，并修复受损的睾丸组织，但不都能使其功能恢复到正常，这说明精索静脉曲张大鼠的睾丸生精小管正常结构遭到严重的不可逆的损害，生精功能就难以纠正至正常状态，因此应在精索静脉产生睾丸损害之前进行防治。
参考文献
[1] 应 俊,姚德鸿,任晓敏,等.BPH病人血清FPSA/TPSA比值的临床应用[J].中华男科学,2001,7(3):167-169.
[2] 安立文,鄢 杰,白贵林,等. 手术配合中药治疗精索静脉曲张不育症50例[J]. 中国中西医结合杂志,2000 ,20(5) :382.
[3] 张秋养,邱曙东,马晓年,等. 青春期大鼠实验性精索静脉曲张模型的建立及其对睾丸的影响[J ] . 西安交通大学学报(医学版) ,2002 ,23(4) :369-372.
[4] 安立文, 隋勇 ,张景欣,等。生精冲剂对精索静脉曲张大鼠睾丸生精功能保护作用的研究[J].中国男科学杂志，2006,20(2):39-42.
[5] 刘建军，董强，杨宇如.实验性精索静脉曲张大鼠血清及睾内睾酮的变化[J].中华男科学杂志.2007,13(4):335-337.
[6] Turner TT, Howards SS. The venous anatomy of experimental left varicocele: Comparison with naturally occurring left varicocele in the humam[J]. Fertil Steril,1994,62(4):869–875.
[7] Amory JK, Bremner W. Endocrine regulation of testicular function in men implications for contraceptive development. Mol Cell Endocrinol[J].2001,182(2): 175-179.
［8］贾金铭，马卫国.中西医结合治疗男性不育症的思路［J］.中国男科杂志，2006,20(7)：1-2.
［9］黄秋婷，陈远峰.枸杞多糖的研究及其进展［J］.食品研究与开发，2006,127(1)：172-175.
［10］周亚东，王燕蓉.枸杞多糖对小鼠生精细胞的影响［J］.江苏中医，1998,19(10)：48.
［11］黄晓兰，杨明亮，吴晓旻，等.枸杞多糖对大鼠生殖糸统保护作用的机制探讨［J］.武汉大学学报(医学版)，2004,25(1)：29-31,41.
［12］赵龙坡，徐铮，张梅，等.枸杞、黄芪对大鼠支持细胞功能的影响［J］.中华男科学杂志，2007,13(1)：82-86.
［13］田代华主编.实用中药辞典［M］.北京：人民卫生出版社，2002,952-1283.
[14] 陈晓岚，段小毛，汤银娟, 等.中药赞育延生饮对生精障碍大鼠治疗作用的实验研究[J].中国男科学杂志,2006,20(11):17-21.
[1]基金项目：河南省自然科学基金 (511044600) 河南省医学科技攻关 (20060037)
郑 州 市 科 技 攻 关 计 划 (052SGYS33216)
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